本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
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本文件由河北省食品工业协会提出并归口。
本文件主要起草单位：石家庄高新技术产业开发区供水排水公司。
本文件主要起草人：
本文件为首次发布。
生活饮用水中嗜肺军团菌的定量测定酶底物法
本文件描述了生活饮用水中嗜肺军团菌的定量测定酶底物法。
本文件适用于生活饮用水中嗜肺军团菌的测定。
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GB/T 5750.2 生活饮用水标准检验方法 水样的采集与保存
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB 19489 实验室生物安全通用要求
本文件没有需要界定的术语和定义。
嗜肺军团菌利用额外添加的酶底物反应生成一种棕色的指示物，使溶液显褐色或呈现浑浊状态。检索MPN表查出样品中嗜肺军团菌浓度。
5 试剂和材料
5.1 培养基：市售LegiolertTM利净得试剂。
5.2 无菌水：满足GB/T 6682三级及以上分析实验用水要求，经121 ℃高压灭菌20 min，备用。
5.4硬度试剂条或相应的测定仪器设备
6 仪器和设备
6.1 无菌采样瓶或采样袋:500mL。
6.2 定量盘：96孔。
6.3 无菌样品瓶：100 mL 。
6.4 程控定量封口机。
6.5 恒温培养箱：39 ℃±0.5 ℃。
6.6 吸管或移液器
7 样品：样品采集与保存应符合GB/T 5750.2的要求。
8 检验步骤
8.1 样品前处理
8.1.1 在无菌操作条件下将100 mL水样倒入无菌样品瓶（6.3）中。
8.1.2 用剩余水样检测硬度，若硬度≤250 mg/L，则在水样中加入0.33 mLα-酮戊二酸溶液（5.3）；若硬度＞250 mg/L，则在水样中加入1.0 mLα-酮戊二酸溶液（5.3）。
8.2 接种
8.2.1 向进行过前处理的水样中加1份培养基（5.1），盖上瓶盖，摇匀直至培养基完全溶解。
8.2.2 将上述溶液全部倒入96孔定量盘（6.2）中，以手抚平定量盘背面，去除孔穴内气泡，用程控定量封口机封口（6.4）。
8.3 培养
封口后的定量盘孔格向上放入 39 ℃±0.5 ℃、保持相对湿度 80%以上，培养箱（6.5）培养7天。
8.4 阴性对照
以 100 mL 无菌水为阴性对照样品，按 8.2和8.3与被检样品同步进行检验。
9 结果与报告
10 9.1 结果判读
与阴性对照，显褐色或浑浊的孔格判定为嗜肺军团菌阳性。
9.2 结果报告
数出显阳性的孔格数，检索MPN表（附录A）报告最大可能数（MPN/100mL）。
11 实验室生物安全
应符合GB 19489 的相关规定。
附 录 A
（资料性）
嗜肺军团菌96孔定量盘MPN表(MPN/100mL)
|
小孔阳性数 |
大孔阳性数 |
||||||
|
0 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
|
|
0 |
＜1.0 |
1.1 |
2.3 |
3.9 |
5.8 |
8.4 |
12.6 |
|
1 |
1.0 |
2.2 |
3.5 |
5.2 |
7.4 |
10.4 |
15.5 |
|
2 |
2.0 |
3.2 |
4.7 |
6.6 |
9.0 |
12.4 |
18.7 |
|
3 |
3.0 |
4.3 |
5.9 |
7.9 |
10.6 |
14.6 |
22.3 |
|
4 |
4.0 |
5.4 |
7.2 |
9.4 |
12.3 |
16.9 |
26.4 |
|
5 |
5.0 |
6.5 |
8.4 |
10.8 |
14.1 |
19.4 |
31.0 |
|
6 |
6.0 |
7.7 |
9.7 |
12.3 |
15.9 |
21.9 |
36.1 |
|
7 |
7.0 |
8.8 |
10.9 |
13.8 |
17.8 |
24.6 |
41.6 |
|
8 |
8.1 |
9.9 |
12.2 |
15.3 |
19.8 |
27.5 |
47.4 |
|
9 |
9.1 |
11.0 |
13.5 |
16.8 |
21.7 |
30.5 |
53.4 |
|
10 |
10.1 |
12.2 |
14.8 |
18.4 |
23.8 |
33.5 |
59.6 |
|
11 |
11.1 |
13.3 |
16.1 |
20.0 |
25.9 |
36.7 |
65.9 |
|
12 |
12.1 |
14.5 |
17.5 |
21.6 |
28.0 |
40.0 |
72.3 |
|
13 |
13.2 |
15.6 |
18.8 |
23.3 |
30.2 |
43.3 |
78.8 |
|
14 |
14.2 |
16.8 |
20.2 |
24.9 |
32.4 |
46.7 |
85.4 |
|
15 |
15.2 |
18.0 |
21.5 |
26.6 |
34.7 |
50.1 |
92.1 |
|
16 |
16.3 |
19.1 |
22.9 |
28.3 |
37.0 |
53.6 |
98.9 |
|
17 |
17.3 |
20.3 |
24.3 |
30.1 |
39.3 |
57.1 |
105.7 |
|
18 |
18.3 |
21.5 |
25.7 |
31.8 |
41.6 |
60.6 |
112.7 |
|
19 |
19.4 |
22.7 |
27.1 |
33.6 |
44.0 |
64.2 |
119.8 |
|
20 |
20.4 |
23.9 |
28.5 |
35.3 |
46.4 |
67.8 |
126.9 |
|
21 |
21.4 |
25.1 |
30.0 |
37.1 |
48.8 |
71.5 |
134.2 |
|
22 |
22.5 |
26.3 |
31.4 |
38.9 |
51.2 |
75.1 |
141.6 |
|
23 |
23.5 |
27.5 |
32.9 |
40.7 |
53.7 |
78.8 |
149.0 |
|
24 |
24.6 |
28.7 |
34.3 |
42.6 |
56.1 |
82.5 |
156.6 |
|
25 |
25.6 |
29.9 |
35.8 |
44.4 |
58.6 |
86.3 |
164.4 |
|
26 |
26.7 |
31.1 |
37.2 |
46.2 |
61.1 |
90.1 |
172.2 |
|
27 |
27.7 |
32.4 |
38.7 |
48.1 |
63.6 |
93.9 |
180.1 |
|
28 |
28.8 |
33.6 |
40.2 |
49.9 |
66.1 |
97.7 |
188.2 |
|
29 |
29.9 |
34.8 |
41.7 |
51.8 |
68.6 |
101.6 |
196.4 |
|
30 |
30.9 |
36.1 |
43.1 |
53.7 |
71.1 |
105.5 |
204.8 |
|
31 |
32.0 |
37.3 |
44.6 |
55.6 |
73.7 |
109.4 |
213.3 |
|
32 |
33.1 |
38.5 |
46.1 |
57.5 |
76.2 |
113.3 |
221.9 |
|
33 |
34.1 |
39.8 |
47.6 |
59.4 |
78.8 |
117.3 |
230.7 |
|
34 |
35.2 |
41.0 |
49.2 |
61.3 |
81.4 |
121.3 |
239.6 |
|
35 |
36.3 |
42.3 |
50.7 |
63.2 |
84.0 |
125.4 |
248.7 |
|
36 |
37.3 |
43.5 |
52.2 |
65.1 |
86.6 |
129.5 |
258.0 |
|
37 |
38.4 |
44.8 |
53.7 |
67.1 |
89.3 |
133.6 |
267.4 |
|
38 |
39.5 |
46.1 |
55.3 |
69.0 |
91.9 |
137.7 |
277.1 |
|
39 |
40.6 |
47.3 |
56.8 |
71.0 |
94.6 |
141.9 |
286.9 |
|
40 |
41.7 |
48.6 |
58.3 |
72.9 |
97.2 |
146.1 |
296.9 |
|
41 |
42.8 |
49.9 |
59.9 |
74.9 |
99.9 |
150.4 |
307.1 |
|
42 |
43.8 |
51.2 |
61.4 |
76.8 |
102.6 |
154.7 |
317.5 |
|
43 |
44.9 |
52.5 |
63.0 |
78.8 |
105.4 |
159.0 |
328.1 |
|
44 |
46.0 |
53.7 |
64.5 |
80.8 |
108.1 |
163.4 |
339.0 |
|
45 |
47.1 |
55.0 |
66.1 |
82.8 |
110.8 |
167.8 |
350.1 |
|
46 |
48.2 |
56.3 |
67.7 |
84.8 |
113.6 |
172.2 |
361.4 |
|
47 |
49.3 |
57.6 |
69.3 |
86.8 |
116.4 |
176.7 |
373.0 |
|
48 |
50.4 |
58.9 |
70.8 |
88.8 |
119.2 |
181.2 |
384.9 |
|
49 |
51.5 |
60.2 |
72.4 |
90.9 |
122.0 |
185.8 |
397.1 |
|
50 |
52.6 |
61.5 |
74.0 |
92.9 |
124.8 |
190.4 |
409.6 |
|
51 |
53.8 |
62.8 |
75.6 |
94.9 |
127.6 |
195.1 |
422.3 |
|
52 |
54.9 |
64.1 |
77.2 |
97.0 |
130.5 |
199.7 |
435.5 |
|
53 |
56.0 |
65.5 |
78.8 |
99.1 |
133.4 |
204.5 |
448.9 |
|
54 |
57.1 |
66.8 |
80.4 |
101.1 |
136.2 |
209.3 |
462.8 |
|
55 |
58.2 |
68.1 |
82.1 |
103.2 |
139.2 |
214.1 |
477.0 |
|
56 |
59.3 |
69.4 |
83.7 |
105.3 |
142.1 |
218.9 |
491.6 |
|
57 |
60.5 |
70.8 |
85.3 |
107.4 |
145.0 |
223.9 |
506.7 |
|
58 |
61.6 |
72.1 |
86.9 |
109.5 |
148.0 |
228.8 |
522.3 |
|
59 |
62.7 |
73.4 |
88.6 |
111.6 |
150.9 |
233.8 |
538.3 |
|
60 |
63.9 |
74.8 |
90.2 |
113.7 |
153.9 |
238.9 |
554.9 |
|
61 |
65.0 |
76.1 |
91.9 |
115.9 |
156.9 |
244.0 |
572.0 |
|
62 |
66.1 |
77.5 |
93.5 |
118.0 |
160.0 |
249.2 |
589.7 |
|
63 |
67.3 |
78.8 |
95.2 |
120.1 |
163.0 |
254.4 |
608.1 |
|
64 |
68.4 |
80.2 |
96.8 |
122.3 |
166.1 |
259.7 |
627.1 |
|
65 |
69.6 |
81.5 |
98.5 |
124.5 |
169.2 |
265.0 |
646.9 |
|
66 |
70.7 |
82.9 |
100.2 |
126.6 |
172.3 |
270.4 |
667.6 |
|
67 |
71.9 |
84.3 |
101.9 |
128.8 |
175.4 |
275.9 |
689.0 |
|
68 |
73.0 |
85.6 |
103.6 |
131.0 |
178.5 |
281.4 |
711.5 |
|
69 |
74.2 |
87.0 |
105.3 |
133.2 |
181.7 |
287.0 |
735.0 |
|
70 |
75.3 |
88.4 |
107.0 |
135.4 |
184.9 |
292.6 |
759.6 |
|
71 |
76.5 |
89.8 |
108.7 |
137.7 |
188.1 |
298.3 |
785.5 |
|
72 |
77.7 |
91.2 |
110.4 |
139.9 |
191.3 |
304.0 |
812.8 |
|
73 |
78.8 |
92.6 |
112.1 |
142.1 |
194.5 |
309.9 |
841.7 |
|
74 |
80.0 |
93.9 |
113.8 |
144.4 |
197.8 |
315.8 |
872.3 |
|
75 |
81.2 |
95.3 |
115.5 |
146.7 |
201.1 |
321.7 |
904.9 |
|
76 |
82.3 |
96.7 |
117.3 |
148.9 |
204.4 |
327.8 |
939.8 |
|
77 |
83.5 |
98.2 |
119.0 |
151.2 |
207.7 |
333.9 |
977.2 |
|
78 |
84.7 |
99.6 |
120.8 |
153.5 |
211.0 |
340.0 |
1017.6 |
|
79 |
85.9 |
101.0 |
122.5 |
155.8 |
214.4 |
346.3 |
1061.6 |
|
80 |
87.1 |
102.4 |
124.3 |
158.1 |
217.8 |
352.6 |
1109.7 |
|
81 |
88.3 |
103.8 |
126.0 |
160.5 |
221.2 |
359.1 |
1162.9 |
|
82 |
89.5 |
105.2 |
127.8 |
162.8 |
224.6 |
365.6 |
1222.4 |
|
83 |
90.7 |
106.7 |
129.6 |
165.2 |
228.1 |
372.1 |
1289.8 |
|
84 |
91.9 |
108.1 |
131.4 |
167.5 |
231.6 |
378.8 |
1367.7 |
|
85 |
93.1 |
109.5 |
133.2 |
169.9 |
235.1 |
385.6 |
1459.8 |
|
86 |
94.3 |
111.0 |
135.0 |
172.3 |
238.6 |
392.4 |
1572.5 |
|
87 |
95.5 |
112.4 |
136.8 |
174.7 |
242.2 |
399.4 |
1717.8 |
|
88 |
96.7 |
113.9 |
138.6 |
177.1 |
245.8 |
406.4 |
1922.6 |
|
89 |
97.9 |
115.3 |
140.4 |
179.5 |
249.4 |
413.6 |
2272.6 |
|
90 |
99.1 |
116.8 |
142.2 |
181.9 |
253.0 |
420.8 |
>2272.6 |